Propiedades nutritivas y tecno funcionales de barras de pseudocereales adicionadas con soya, mango y granada / Nutritional and techno functional properties of pseudocereal bars added with soy, mango and pomegranate

Las barras de cereal (BC), se comercializan como un snack saludable, no obstante, su calidad nutricional es baja. Una alternativa para mejorar esto, es la incorporación de ingredientes como pseudocereales, germinados y subproductos de fruta. Objetivo. Evaluar el contenido nutricional y propiedades tecnofuncionales de una barra de cereal formulada a partir de pseudocereales, germinados de soya y subproductos del procesamiento de frutas. Materiales y Métodos. Se desarrollaron 6 formulaciones (F0-F5). Se determinó el contenido de proteína y fibra cruda, se seleccionó la formulación que presentó el mayor contenido de estos componentes. A la BC seleccionada se le determinó la digestibilidad in-vitro de la proteína, las propiedades tecnofuncionales potencial prebiótico y actividad inhibitoria de ECA-I. Resultados. La formulación seleccionada fue F1 (13,6 g/100 g p.s. proteína y 13,1 g/100 g p.s. fibra cruda). La digestibilidad de la proteína fue del 69 %, el cual es cercano a valores reportados para algunos componentes de la BC. La capacidad de hinchamiento y retención de agua fue 2,55 ml/g; 12,74 %, respectivamente. El crecimiento de L. brevis en medio MRS modificado con BC no presentó diferencias estadísticas con el medio control, indicando el potencial prebiótico presente en la BC. La barra de cereal tuvo un 39% de actividad inhibitoria de ECA-I, demostrando la acción de los compuestos bioactivos posiblemente liberados durante la digestión de la BC. Conclusión. La formulación desarrollada presenta propiedades funcionales importantes y podría generar beneficios para la salud(AU)

Introduction. Cereal bars (CB) are marketed as a healthy snack; however, their nutritional quality is low. An alternative to improve this is the incorporation of ingredients such as soybean sprouts, which have a higher protein content than some seeds; as well as fruit by-products that contain important bioactive compounds. Objective. To evaluate the nutritional content and techno-functional properties of a cereal bar formulated from pseudocereals, soybean sprouts, and fruit processing by-products. Materials and Methods. 6 formulations (F0-F5) were developed. The content of protein and crude fiber was determined, the formulation that presented the highest content of these components was selected. The in-vitro digestibility of the protein, the technofunctional properties, potential prebiotic and inhibitory activity of ACE-I were determined for the selected BC. Results. The selected formulation was F1 (13.6g/100g p.s. protein and 13.1g/100 g p.s. crude fiber). Protein digestibility was 69%, which is close to reported values for some CB components. The swelling and water retention capacity was 2.55 ml/g; 12.74%, respectively. The growth of L. brevis in modified MRS medium with CB did not present statistical differences with the control medium, indicating the prebiotic potential present in CB. The cereal bar had 39% ACE-I inhibitory activity, demonstrating the action of bioactive compounds possibly released during CB digestion. Conclusion. The developed formulation has important functional properties and could generate health benefits(AU)

Portrayal of Punica granatum L. peel extract through High Performance Liquid Chromatography and antimicrobial activity evaluation / Retrato do extrato de casca de Punica granatum L. por meio de cromatografia líquida de alto desempenho e avaliação da atividade antimicrobiana

Abstract Increasing trend in antimicrobial resistance and failure of chemically synthesized antibiotics lead to discover alternative methods for the treatment of bacterial infections. Various medicinal plants are in use traditionally and their active compounds can be further applied for treatment of bacterial diseases. This study was designed to determine the antibacterial activity of Punica granatum (P. granatum L.) (pomegranate) peel extract against Enterobacteriaceae [Escherichia coli (E. coli), Salmonella Typhimurium (S. Typhimurium) and Shigella Dysenteriae (S. Dysenteriae)] and gram-positive bacterium [Staphylococcus aureus (Staph aureus)]. Methanolic extract of P. granatum L. peel was prepared by Soxhlet apparatus method. Total flavonoid and phenolic contents from the extract were determined by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The antibacterial activity of P. granatum L. peel extract was evaluated through agar well diffusion method. HPLC showed the range of phenolics (gallic acid, caffeic acid, benzoic acid, cinnamic acid) and flavonoid compounds. The chemical structures of flavonoid and phenolics found in the methanolic extract of P. granatum L. peel have been reported for the first time. The methanolic peel extract (50 ul) of yellow P. granatum L. showed 26, 10, 10 and 9mm zones of inhibition (ZOI) against S. aureus, S. Typhimurium, S. Dysenteriae and E. coli, respectively. The methanolic extract of red P. granatum L. (100 ul) showed 27, 8, 12 and 15 mm ZOI against Staph. aureus, S. Typhimurium, S. Dysenteriae and E. coli, respectively. Highest ZOI was observed against Staph. aureus. Many of the bacteria studied in the present work may cause serious gastrointestinal infections, which can lead to hemorrhagic diarrhea in children. These infections can be life-threatening to young children and the elderly. There is an incentive to find alternative control measures, such as plant and herbal extracts, especially in lesser-developed countries where traditional antibiotics may not be readily available.

Resumo A tendência crescente na resistência antimicrobiana e na falha dos antibióticos sintetizados quimicamente leva à descoberta de métodos alternativos para o tratamento de infecções bacterianas. Várias plantas medicinais estão em uso tradicionalmente e seus compostos ativos podem ser posteriormente aplicados para o tratamento de doenças bacterianas. Este estudo foi desenhado para determinar a atividade antibacteriana do extrato de casca de Punica granatum (P. granatum L.) (romã) contra Enterobacteriaceae [Escherichia coli (E. coli), Salmonella Typhimurium (S. Typhimurium) e Shigella Dysenteriae (S. Dysenteriae) ] e bactéria gram-positiva [Staphylococcus aureus (Staph aureus)]. O extrato metanólico da casca de P. granatum L. foi preparado pelo método do aparelho de Soxhlet. O conteúdo total de flavonoides e fenólicos do extrato foi determinado por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). A atividade antibacteriana do extrato da casca de P. granatum L. foi avaliada através do método de difusão em ágar. HPLC mostrou a gama de compostos fenólicos (ácido gálico, ácido cafeico, ácido benzoico, ácido cinâmico) e flavonoides. As estruturas químicas de flavonoides e fenólicos encontradas no extrato metanólico da casca de P. granatum L. foram relatadas pela primeira vez. O extrato metanólico da casca (50 ul) de P. granatum L. amarelo apresentou zonas de inibição (ZOI) de 26, 10, 10 e 9mm contra S. aureus, S. Typhimurium, S. Dysenteriae e E. coli, respectivamente. O extrato metanólico de P. granatum L. vermelho (100 ul) apresentou 27, 8, 12 e 15 mm IOI contra Staph. aureus, S. Typhimurium, S. Dysenteriae e E. coli, respectivamente. O ZOI mais alto foi observado contra Staph. aureus. Muitas das bactérias estudadas no presente trabalho podem causar infecções gastrointestinais graves, que podem levar à diarreia hemorrágica em crianças. Essas infecções podem ser fatais para crianças pequenas e idosos. Há um incentivo para encontrar medidas de controle alternativas, como extratos de plantas e ervas, especialmente em países menos desenvolvidos, onde os antibióticos tradicionais podem não estar prontamente disponíveis.

Extratos hidroetanólicos de canela (Cinnamomum verum) e romã (Punica granatum L) promovem ação antibacteriana frente cepas resistentes a antibióticos de Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa / Cinnamon (Cinnamomum verum) and pomegranate (Punica granatum L) hydroethanolic extracts promote antibacterial action against antibiotic-resistant strains of Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa

A resistência bacteriana tem aumentado progressivamente no mundo, assim, há necessidade de novas opções de tratamentos. A fitoterapia tem ganhado notoriedade para combater infecções, principalmente as causadas por bactérias resistentes aos antibacterianos disponíveis. Diante do exposto, o presente estudo teve como objetivo preparar e analisar a composição fitoquímica e a ação antibacteriana dos extratos hidroetanólicos de canela (EHC) e romã (EHR) isolados e associados frente culturas planctônicas e biofilmes de cepas padrão e clínicas de Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa, além disso, analisar a ação citotóxica dos extratos em queratinócitos humanos (HaCat). Para isso, os EHC e EHR foram preparados e quantificado o teor de sólidos solúveis. Posteriormente, foi quantificado o teor de flavonoides e fenóis totais, análise antioxidante por meio da redução do radical 2,2'-difenil-1-picrilhidrazila (DPPH), e a fitoquímica por cromatografia líquida (HPLC). Em relação a ação antibacteriana dos extratos, foi aplicado o teste de microdiluição em caldo (CLSI ­ M7-A9) e a ação sinérgica realizada por meio do ensaio de checkerboard. As concentrações mais efetivas foram analisadas sobre biofilmes em formação (prevenção) e biofilmes formados (tratamento de 24 h), e quantificada a viabilidade por meio do teste colorimétrico MTT. Para avaliar a citotoxidade, os tratamentos foram aplicados sobre cultura celular de HaCat por 24 h e analisados por meio do teste colorimétrico MTT. A análise estatística foi realizada com 5% de significância (p<0.05), analisados pelo método ANOVA complementado pelo Teste de Tukey. Os resultados demonstraram que os EHC e EHR possuem ação antioxidante e presença de fitocompostos. Os extratos apresentaram ação antibacteriana para todas as cepas avaliadas, quando os mesmos foram associados, obteve-se concentrações sinérgicas para as cepas clínicas de A. baumannii. Em relação a ação antibiofilme, o EHC inibiu a formação em 95% e EHR em 96% do biofilme de #Ab 1, enquanto a cepa #Pa 2 teve 92% e 93% de inibição quando em contato com EHC e EHR, respectivamente. Após tratamento de 24 h em biofilmes formados, as reduções da viabilidade foram de 72% para as cepas #Ab 2 e #Ab 3 quando em contato com o EHC, já EHR inibiu em 83% a viabilidade da cepa #Ab ATCC. Para P. aeruginosa (#Pa 2), as reduções da viabilidade foram de 84% e 88,5% quando tratados com EHC e EHR, respectivamente. A avaliação da citotoxicidade em HaCat demonstrou que após tratamentos com diferentes concentrações dos extratos a viabilidade celular se manteve acima de 70% em todos os grupos. Diante disso, conclui-se que os EHC e EHR apresentam importante ação antioxidante e antibacteriana, tanto em culturas planctônicas quanto em biofilmes, e não apresentaram efeitos citotóxicos na faixa de concentração testada. (AU)

Bacterial resistance has progressively increased in the world, thus, there is a need for new treatment options. Phytotherapy has gained notoriety for fighting infections, mainly those caused by bacteria resistant to available antibacterials. In view of the above, the present study aimed to prepare and analyze the phytochemical composition and antimicrobial action of hydroethanolic extracts of cinnamon (EHC) and pomegranate (EHR) isolated and associated against planktonic cultures and biofilms of standard and clinical strains of Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa, in addition, analyze the cytotoxic action of the extracts on human keratinocytes (HaCat). For this, the EHC and EHR were prepared and the soluble solids content was quantified. Subsequently, the content of flavonoids and total phenols, antioxidant analysis through the reduction of the radical 2,2'-diphenyl1-picrylhydrazyl (DPPH), and phytochemistry by liquid chromatography (HPLC) were quantified. Regarding the antimicrobial action of the extracts, the broth microdilution test (CLSI ­ M7-A9) was applied and the synergistic action was performed through the checkerboard test. The most effective concentrations were analyzed on forming biofilms (prevention) and formed biofilms (24 h treatment), and viability was quantified using the MTT colorimetric test. To evaluate the cytotoxicity, the treatments were applied on HaCat cell culture for 24 h and analyzed using the MTT colorimetric test. Statistical analysis was performed with 5% significance (p<0.05), analyzed by the ANOVA method complemented by the Tukey test. The results showed that the EHC and EHR have antioxidant action and presence of phytocompounds. The extracts showed antibacterial action for all evaluated strains, when they were associated, synergistic concentrations were obtained for the clinical strains of A. baumannii. Regarding the antibiofilm action, EHC inhibited formation by 95% and EHR by 96% of the #Ab 1 biofilm, while the #Pa 2 strain had 92% and 93% inhibition when in contact with EHC and EHR, respectively. After 24 h treatment in formed biofilms, viability reductions were 72% for strains #Ab 2 and #Ab 3 when in contact with EHC, whereas EHR inhibited the viability of strain #Ab ATCC by 83%. For P. aeruginosa (#Pa 2), viability reductions were 84% and 88.5% when treated with EHC and EHR, respectively. The evaluation of cytotoxicity in HaCat showed that after treatments with different concentrations of extracts, cell viability remained above 70% in all groups. Therefore, it is concluded that EHC and EHR have important antioxidant and antibacterial action, both in planktonic cultures and in biofilms, and did not show cytotoxic effects in the tested concentration range. (AU)

Punica granatum and amygdalin extracts plus cobalamin combined with albendazole reduce larval burden and myositis in experimental trichinosis / Extratos de Punica granatum e amígdalina mais cobalamina combinado com albendazol reduzem a carga larvar e a miosite na triquinose experimental

Abstract Trichinellosis is a zoonosis results from eating raw or semi-cooked meat of infected animals. Medicinal plants have been used lately as alternatives and/or combined therapies to resolve some drawbacks of the current regimens. This work analyzed the effect of albendazole monotherapy on Trichinella spiralis experimental infection (group A), in comparison to P. granatum and amygdalin extracts +cobalamin (group B), plus its combination with albendazole (group C). The study revealed that the extracts alone or combined with albendazole had an inferior effect to albendazole monotherapy regarding number of adult worms (40.83 ±3.82, 18.67 ±1.86 and 16.83 ±2.32, respectively). However, their effect was more obvious in muscle phase combined with albendazole, achieving the lower number of larvae/mL tissue homogenate (22.33 ±3.27 in comparison to 39.67 ±2.58 achieved by albendazole monotherapy). The extracts exerted a significant immunomodulatory effect by reducing the local CD4+ expression in the intestine as well as in muscle phase (1.15 ±0.25 and 3.80 ±0.65 in comparison to 4.97 ±0.37 and 12.20 ±0.87 with albendazole monotherapy, respectively). So, these extracts improved the therapeutic efficacy of albendazole, specifically in muscle phase and counteracted the inflammatory reaction caused by albendazole monotherapy, thus extensively alleviating the resulting myositis.

Resumo Trichinellosis é uma zoonose resultante da ingestão de carne crua ou semicozida de animais infectados. As plantas medicinais têm sido usadas, ultimamente, como alternativas e/ou terapias combinadas, para resolver algumas desvantagens dos regimes atuais. Este trabalho analisou o efeito da monoterapia albendazole na infecção experimental por Trichinella spiralis (grupo A), em comparação com extratos de P. granatum e amígdalina +cobalamina (grupo B), além de sua combinação com albendazol (grupo C). O estudo revelou que os extratos sozinho ou combinado com albendazol teve efeito inferior à monoterapia albendazol em relação ao número de vermes adultos (40,83 ±3,82, 18,67 ±1,86 e 16,83 ±2,32, respectivamente). No entanto, seu efeito foi mais óbvio na fase muscular combinado com o albendazol, alcançando o menor número de larvas/mL homogeneizado de tecido (22,33 ±3,27 em comparação com 39,67 ±2,58 obtidos pela monoterapia albendazol). Os extratos exerceram um efeito imunomodulatório significativo, ao reduzir a expressão local CD4+ no intestino, bem como na fase muscular (1,15 ±0,25 e 3,80 ±0,65 em comparação com 4,97 ±0,37 e 12,20 ±0,87 com monoterapia albendazol, respectivamente). Assim, esses extratos melhoraram a eficácia terapêutica do albendazol, especificamente na fase muscular e neutralizaram a reação inflamatória causada pela monoterapia albendazol, aliviando extensivamente a miosite resultante.

An aqueous pomegranate peel extract (Punica granatum) protect against Elastase-induced pulmonary emphysema in Sprague Dawley rats model

We investigated the effect of Punica granatum peel aqueous extract (PGE), on pulmonary inflammation and alveolar degradation induced by intratracheal administration of Elastase in Sprague Dawley rats. Lung inflammation was induced in rats by intratracheal instillation of Elastase. On day 1 and 2, animals received an intraperitoneal injection of PGE (200 mg/mL), three hours later, they were intratracheally instilled with 25U/kg pancreatic porcine Elastase. Animals were sacrificed 7 days later. Bronchoalveolar lavage (BAL) were collected and cellularity, histology and mRNA expression of Monocyte chemotactic protein 1(MCP-1), Tumor Necrosis Factor-Alpha (TNF-α), Interleukin 6 (IL-6), and Matrix Metalloproteinase-2 (MMP-2) were studied. In addition, activity of TNF- α, IL-6 and MCP-1 on BAL were also analyzed by ELISA Kit. Elastase administration increased: BAL cellularity, neutrophils recruitment and BAL MCP1, IL-6 expressions. It also increased lung TNF-α, MCP-1, MMP-2 expressions, platelets recruitment, histological parameters at 7th day of elastase treatment. Intraperitoneal injection of 200 mg/kg of PGE reduced, significantly, BAL cellularity, and neutrophils recruitment. However, in animal treated with PGE, MCP-1, MMP-2 and IL-6 on day 7, were similar to the Sham group. Treatment with PGE (200 mg/ kg) also significantly reduced lung TNF-α, and MCP-1 expression. This study reveals that PGE Punica granatum protects against elastase lung inflammation and alveolar degradation induced in rats

Genetic diversity among wild pomegranate (Punica granatum) in Azad Jammu and Kashmir region of Pakistan

BACKGROUND: Pomegranate (Punica granatum L.), one of the most important tropical fruits in Azad Jammu and Kashmir regions of Pakistan, is highly valued for its nutrition and medicinal purposes. Although pomegranate is native to this region, the genetic diversity among wild pomegranate accessions is currently unknown. Such information would be vital for germplasm conservation and breeding efforts. In the current study, genetic diversity among forty-eight wild pomegranate accessions collected from different agro-ecological zones of Azad Jammu and Kashmir was assessed using 41 simple sequence repeat (SSR) markers. RESULTS: The markers revealed 303 alleles averaging 7.39 alleles per marker. Polymorphic information content ranged from 0.12 (PGCT093B) to 0.88 (Pom006), with a mean of 0.54. The average genetic distance (GD) across all genotypes was 0.52, and was lowest between Chattar Class and Thorar genotypes (GD = 0.27), but highest between Khun Bandway and Akhor Ban (GD = 0.74). A neighbor-joining dendrogram separated the genotypes into three major clusters, with further sub-clustering within each cluster. CONCLUSIONS: Overall, the results presented here show significant genetic diversity among wild pomegranate accessions in Azad Jammu and Kashmir region of Pakistan. These accessions present a valuable genetic resource to breeding and cultivar improvement programs within the region.

Os efeitos da Punica granatum L. em diferentes concentrações sobre duas linhagens celulares: estudo in vitro / The effects of Punica granatum L. at different concentrations on two cell lines: in vitro study

Introdução: A Punica granatum L. (PG), utilizada como medicamento fitoterápico, apresenta propriedades terapêuticas, anti-inflamatórias e antioxidante. Embora diversos estudos já tenham sido realizados com este fitoterápico, seus possíveis efeitos citotóxicos nos tecidos humanos ainda não são claros. Objetivo: Avaliar a citotoxicidade da PG por meio de cultura celular com duas linhagens: fibroblastos humanos de mucosa oral (FLM) e células de carcinoma epidermoide oral humano (KB). Material e método: As células foram submetidas ao teste de viabilidade celular por 24 horas nas concentrações da PG 1%, 0,50%, 0,25%, 0,125%, 0,062% e 0,031%, e aos testes de citotoxicidade celular em 4 horas, 1, 3, 5 e 7 dias, em diferentes concentrações, realizados em triplicata. Foi utilizado um controle negativo (Triton 1%) e um controle positivo sem o extrato de PG. Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA (p < 0,05). Resultado: Foi possível observar que o extrato da PG possui efeitos inibitórios, apresentando-se maior nas células KB em relação às FLM. Os testes de citotoxicidade e viabilidade mostraram inibição e morte das células KB e FLM nas concentrações 1%, 0,50% e 0,25%. Conclusão: O efeito inibitório da PG foi dose-dependentes, mostrando-se maior nas células KB em relação às FLM.

Introduction: Punica granatum L. (PG), used as a herbal medicine, has therapeutic, anti-inflammatory and antioxidant properties, although several studies have already been carried out with this herbal medicine, its possible cytotoxic effects on human tissues are still unclear. Objective: To evaluate the cytotoxicity of PG through cell culture with two strains: human oral mucosa fibroblasts (LFM) and human oral squamous cell carcinoma (KB) cells. Material and method: The cells were submitted to the cell viability test for 24 hours in the concentrations of PG 1%, 0.50%, 0.25%, 0.125%, 0.062% and 0.031% and the cell cytotoxicity tests in 4 hours, 1, 3, 5 and 7 days in different concentrations, performed in triplicate. A negative control (Triton 1%) and a positive control without the PG extract were used. The data obtained were submitted to ANOVA (p <0.05). Result: it was possible to observe that the PG extract has inhibitory effects, being higher in KB cells in relation to LFM. The cytotoxicity and viability tests showed inhibition and death of KB and FLM cells at concentrations of 1%, 0.50% and 0.25%. Conclusion: The inhibitory effect of PG was dose dependent, showing itself to be greater in KB cells compared to LMB.

Extrato da casca de Punica granatum potencializa o efeito anti cárie de um enxaguatório bucal contendo trimetafosfato de sódio e flúor / Punica granatum peel extract enhances the anti caries effect of mouthwash containing sodium trimetaphosphate and fluoride

A cárie dentária está entre as principais e mais comuns doenças bucais. É causada por ácidos produzidos pelo biofilme microbiano que levam à desmineralização do esmalte. A prevenção e controle dessa doença crônica consistem na desorganização periódica do biofilme e na promoção da remineralização dentária. Para resolver esse problema, associamos o extrato de casca de Punica granatum (romã) (PPE) ao trimetafosfato de sódio (TMP) e fluoreto (F) em formulações para uso como enxaguatório bucal, e avaliamos sua eficácia na redução do processo de desmineralização do esmalte dental, bem como seu potencial anti biofilme contra importantes patógenos orais presentes na cárie dentária (Streptococcus mutans ATCC 25175 e Candida albicans ATCC 10231). Blocos de esmalte bovino (4 mm × 4 mm) selecionados por dureza superficial inicial (SHi) foram alocados aleatoriamente de acordo com grupos de tratamentos de formulação (n = 12 / grupo): ETF1 (3,0% PPE + 0,2% TMP + 100ppmF), TF1 (0,2% TMP + 100ppmF), ETF2 (3,0% PPE + 0,3% TMP + 225ppmF), TF2 (0,3% TMP + 225ppmF), F1 (100 ppmF), F2 (225 ppmF) e P (formulação sem E / T / F - placebo). Os blocos foram tratados 2x / dia com cada formulação e submetidos a cinco ciclos de pH (soluções desmineralizantes / remineralizantes) a 37° C. A seguir, determinaram-se a dureza superficial final (SHf), a dureza integrada da subsuperfície de perda (ΔKHN) padronizada e as concentrações de fluoreto de esmalte (F) de cálcio (Ca) e fósforo (P). A porcentagem de perda de dureza superficial (% SH) foi calculada (% SH = [(SHf - SHi) / SHi)] x 100), e as formulações que promoveram menores porcentagens de desmineralização do esmalte (% SH) e suas contrapartes foram selecionadas para os ensaios anti biofilme, bem como a formulação contendo apenas PPE (E). Para isso, ETF2 e TF2 (% SH = -34,5% e -53,1%, respectivamente), e a formulação E foram usadas para tratar por 1 ou 10 minutos biofilmes duplos de C. albicans e S. mutans crescidos por 24 horas em discos de hidroxiapatita (HA). A desmineralização da superfície do esmalte foi menor nas amostras tratadas com a formulação ETF2, resultando em uma diminuição de 46% na% SH em comparação com a F2. Novamente, a capacidade de reduzir o corpo da lesão (ΔKHN) foi maior (~ 26%) com ETF2 em relação a F2, e F2 proporcionou a maior concentração de F, Ca e P na superfície do esmalte. Entre as formulações de enxaguatório bucal ETF2, TF2 e E, as maiores taxas de redução de células viáveis foram exibidas tratando o biofilme com ETF2 por 10 minutos, independentemente do microrganismo testado. Em conclusão, a adição de PPE (3%) em enxaguatórios bucais contendo TMP (0,3) e F (225ppm) promoveu uma diminuição considerável no mineral sem perda de esmalte dental, além de reduzir consideravelmente o biofilme cariogênico formado por S. mutans e C albicans. Assim, cria uma perspectiva promissora para o desenvolvimento de um produto comercial dental sem álcool com os benefícios de milênios reconhecidos à saúde do Punica granatum(AU)

Dental caries is among the main and most common oral diseases. It is caused by acids produced by microbial biofilm that lead to enamel demineralization. The prevention and control of this chronic disease consist of periodic disorganization of the biofilm and the promotion of dental remineralization. To address this problem, we associate Punica granatum (pomegranate) peel extract (PPE) with sodium trimemtaphosphate (TMP), and fluoride (F) in formulations for being used as mouthwash, and evaluate its efficacy on reducing dental enamel demineralization process as well as its antibiofilm potential against important oral pathogens present in dental caries (Streptococcus mutans ATCC 25175 and Candida albicans ATCC 10231). Bovine enamel blocks (4 mm × 4 mm) selected by initial surface hardness (SHi) were randomly allocated according to groups of formulation treatments (n= 12/group): ETF1 (3.0%PPE+0.2%TMP+100ppmF), TF1 (0.2%TMP+100ppmF), ETF2 (3.0%PPE+0.3%TMP+225ppmF), TF2 (0.3%TMP+225ppmF), F1 (100 ppmF), F2 (225 ppmF), and P (formulation without E/T/F - placebo). The blocks were treated 2×/day with each formulation and submitted to five pH cycles (demineralizing/remineralizing solutions) at 37°C. Next, final surface hardness (SHf), integrated loss subsurface hardness (ΔKHN), and enamel fluoride (F) calcium (Ca) and phosphorus (P) concentrations were determined. The percentage of surface hardness loss (%SH) was calculated (%SH = [(SHf - SHi)/SHi)] x 100), and the formulations which promoted lower percentages of enamel demineralization (%SH) and its counterparts were selected to the antibiofim assays, as well as formulation containing only PPE (E). For that, ETF2 and TF2 (%SH= -34.5% and -53.1% respectively), and formulation E were used to treat for 1 or 10 minutes dual biofilms of C. albicans and S. mutans grown for 24 hours on hydroxyapatite discs (HA). Demineralization of the enamel surface was lower in samples treated with formulation ETF2, resulting in a 46% decrease in %SH in comparison with F2. Again, the capacity to reduce the lesion body (ΔKHN) was higher (~ 26%) with ETF2 in relation to F2, and F2 provided the highest concentration of F, Ca and P in enamel surface. Amongst the mouthwash formulations ETF2, TF2 and E, the highest rates of viable cells reduction were exhibited by treating biofilm with ETF2 for 10 minutes regardless of the microorganism tested. In conclusion, the addition of PPE (3%) in mouthwashes containing TMP (0.3) and F (225ppm) promoted a considerably decrease in the mineral loss of dental enamel besides considerable reducing cariogenic biofilm formed by S. mutans and C. albicans. It thus creates a promising prospect for the development of an alcohol free dental commercial product with the millennial recognized health benefits of Punica granatum(AU)

Actividad cicatrizante in vivo del polvo carbonizado de Punica granatum Linn y Eichhornia crassipes / In vivo healing activity of the charred powder of Punica granatum Linn and Eichhornia crassipes

Introducción: Las especies vegetales constituyen el remedio primero a los problemas de salud que aquejan a las personas. La granada es rica en ácido ascórbico, mejora la barrera epidérmica y reduce la contracción de las heridas. La flor de agua posee actividad antibacteriana. Objetivo: Evaluar el efecto cicatrizante del polvo carbonizado de Punica granatum Linn (granada) y de Eichhornia crassipes (flor de agua), en un modelo experimental en ratas. Métodos: Estudio analítico experimental con el empleo 30 ratas macho distribuidas en 3 grupos (n= 10). Grupo I y II; tratadas con el polvo carbonizado de la granada y flor de agua respectivamente. Grupo III: Tratadas con cloruro de sodio al 0,9 por ciento. Se realizó un modelo de herida por escisión en el dorso. La evolución de la cicatrización fue seguida por la velocidad de contracción de la herida en milímetros. Se realizó histología sobre biopsias de tejido cicatrizado. Para el análisis estadístico se empleó la prueba no paramétrica de Mann- Whitney. El nivel de significación se fijó en p < 0,05. Resultados: Se comprobó el efecto cicatrizante de los polvos carbonizados de la granada y flor de agua; disminuyó el área de las heridas de manera significativa respecto al grupo control. El estudio histológico mostró dermis madura grado III en los grupos I y II. Conclusiones: La aplicación tópica del polvo carbonizado de granada y de flor de agua influyó sobre el cierre de las heridas y en la maduración de la dermis, por lo cual favoreció la cicatrización(AU)

ABSTRACT Introduction: Plant species are the first remedy to the people's health problems. The pomegranate is rich in ascorbic acid, improves the epidermal barrier and reduces the contraction of wounds. The water hyacinth has antibacterial activity. Objective: To evaluate the healing effect of the charred powder of Punica granatum Linn (pomegranate) and Eichhornia crassipes (water hyacinth), in an experimental model in rats. Methods: Experimental analytical study with 30 male rats distributed in 3 groups (n = 10). Group I and II; treated with the charred powder of the pomegranate and water hyacinth respectively. Group III: treated with 0.9 percent sodium chloride. An incision wound model was made on the back. The evolution of healing was followed by the speed of contraction of the wound in millimeters. Histology was performed on biopsies of scar tissue. For the statistical analysis, the nonparametric Mann-Whitney test was used. The level of significance was set at p < 0.05. Results: The healing effect of the charred powders of the pomegranate and water hyacinth was verified; decreased the wound area significantly compared to the control group. The histological study showed mature grade III dermis in groups I and II. Conclusions: The topical application of the charred powder of pomegranate and water hyacinth influenced the closure of the wounds and the maturation of the dermis, which favored healing(AU)

Evaluación de la actividad inmunomoduladora del polvo seco de Punica granatum Linn en un modelo experimental de inmunosupresión / Evaluation of the immunomodulatory activity of dry powder of Punica granatum Linn in an experimental model of immunosuppression

Introducción: La inmunosupresión es uno de los principales obstáculos en el tratamiento de cáncer, por esta razón, diversos inmunomoduladores naturales y sintéticos son estudiados, con el fin de atenuar los efectos de la terapia convencional. Objetivo: Evaluar la actividad inmunomoduladora del polvo seco de Punica granatum Linn (granada). Métodos: Ratas machos Wistar fueron divididas en cuatro grupos: grupo I (control), II (inmunizado con glóbulos rojos de carnero), III (inmunosuprimido con ciclofosfamida e inmunizado con glóbulos rojos de carnero) y IV (tratado con polvo de granada, inmunosuprimido con ciclofosfamida e inmunizado con glóbulos rojos de carnero). Las variables estudiadas fueron el peso corporal y detección de anticuerpos hemoaglutinantes. Resultados: Se observó ligera tendencia al aumento del peso corporal en los grupos I, II y III, con respuesta diferente en el grupo IV, donde hubo una leve disminución. El título de anticuerpos del grupo III disminuyó con respecto al II y IV, tanto en la respuesta primaria como secundaria. En el grupo IV el título de anticuerpos resultó ser estadísticamente significativo con relación al del grupo III (p= 0,000) para ambas respuestas. Conclusiones: La Púnica granatum mostró efecto inmunomodulador, al incrementar el nivel de anticuerpos hemaglutinantes(AU)

Introduction: Immunosuppression is one of the main obstacles in the treatment of cancer, for this reason, several natural and synthetic immunomodulators are studied, in order to attenuate the effects of conventional therapy. Objective: To evaluate the immunomodulator activity of Punica granatum Linn (pomegranade). Methods: Wistar male rats were divided into four groups: group I (control), II (immunized with red blood cells of sheep), III (immunosuppressed with cyclophosphamide and immunized with red blood cells of sheep) and IV (treated with pomegranate powder, immunosuppressed with cyclophosphamide and immunized with red blood cells of sheep). The variables studied were body weight and detection of haemagglutinating antibodies. Results: A slight tendency to increase body weight was observed in groups I, II and III, with a different response in group IV, where there was a slight decrease. The antibody titre of group III decreased with respect to II and IV, both in the primary and secondary response. In group IV the antibody titer was found to be statistically significant in relation to group III (p = 0.000) for both responses. Conclusions: Punic granatum showed immunomodulatory effect, increasing the level of haemagglutinating antibodies(AU)

Um caso de alergia a romã e a noz ­ qual o papel da proteína de transferência lipídica Pru p 3? / A case of allergy to pomegranate and walnut: what is the role of lipid transfer protein Pru p 3?

As proteínas de transferência lipídica (LTPs) são pan-alergênios responsáveis pela reatividade cruzada entre frutos, vegetais e polens. A Pru p 3 (LTP presente no pêssego) é reconhecida como marcador de gravidade na alergia alimentar. A romã e a noz são frutos relatados como causas de reações alérgicas devido à existência de LTPs. Reportamos o caso de um adolescente admitido por urticária e edema labial após ingestão de romã, com história prévia semelhante após ingestão de noz. Os testes cutâneos revelaram positividade para extratos comerciais de noz e para a polpa de romã, e foram negativos para gramíneas e pêssego. Apresentava um doseamento de imunoglobulina E (IgE) total de 87,2 UI/mL e IgE específicas (sIgE) para noz e avelã positivas. O doseamento de sIgE pelo método ISAC (immuno-solid-phase allergen chip) revelou positividade para os alergênios da avelã (Cor a 8), do pêssego (Pru p 3) e da noz (Jug r 3). Não havia história de reação alérgica à ingestão de pêssego. O caso questiona a relevância da sensibilização ao Pru p 3 em doentes não alérgicos ao pêssego, e se este será o único marcador de reação cruzada com a romã.

Lipid transfer proteins (LTPs) are pan-allergens that are responsible for cross-reactivity between fruits, vegetables, and pollen. Pru p 3, the LTP present in the peach, is recognized as a marker of severity in food allergy. Pomegranate and walnut have been reported to be involved in allergic reactions due to the existence of LTPs. We report the case of a teenager admitted with rash and swollen lips after the ingestion of pomegranate, and reporting a similar reaction in the past after ingesting walnut. Skin tests showed positive results for commercial extracts of walnut and pomegranate pulp, and were negative for grass and peach. The total immunoglobulin E (IgE) was 87.2 IU/mL and specific IgE (sIgE) testing for walnut and hazelnut was positive. sIgE determination using the ISAC method (immuno-solid-phase allergen chip) was positive for hazelnut (Cor A 8), peach (Pru p 3) and walnut (Jug r3). There was no history of allergic reaction after the ingestion of peach. The present case questions the relevance of Pru p 3 in patients who are not allergic to peach, and whether this is the only cross-reactive marker with pomegranate.

Punica granatum Linn. prevention of oral candidiasis in patients undergoing anticancer treatment / Punica granatum Linn. na prevenção da candídiase oral em pacientes que se submetem a tratamento antineoplásico

Introduction: Oral candidiasis is considered one of the complications of antineoplastic therapy of head and neck. Studies show that herbal medicine has proven to be a promising alternative for the treatment of candidiasis. Objective: To evaluate the effectiveness of the gel Punica granatum Linn. in the prevention of oral candidiasis in patients undergoing radiotherapy with or without chemotherapy for squamous cell carcinoma of the head and neck, and adverse effects associated with its use. Material and method: It was performed a clinical trial, double blind, in the period 2012-2013, with patients seen at a referral hospital for cancer treatment. The sample consisted of 17 patients who did not have signs nor symptoms of oral candidiasis. These patients were divided into two groups: experimental (n=11): composed of patients who used the gel Punica granatum Linn. 6.25% since the beginning of the anticancer treatment and completed a week after the end of the treatment regimen; control (n=6): for patients who used the gel Miconazol 2%, following the same guidelines of the previous group. Data were tabulated and analyzed using descriptive statistics, the chi-square test and calculation of continuing Yates correction (p<0.05). Result: There was no oral candidiasis in 63.6% of patients in the experimental group and in none of the control group patients. Conclusion: Most patients who used the experimental gel showed no clinical signs of fungal infection, and there was no association of adverse effects.

Introdução: A candidíase oral é considerada uma das complicações da terapia antineoplásica de cabeça e pescoço. Estudos revelam que a fitoterapia vem se mostrando uma alternativa promissora para o tratamento da candidíase. Objetivo: Avaliar a efetividade do gel de Punica granatum Linn. na prevenção da candidíase oral, em pacientes submetidos à radioterapia associada ou não a quimioterapia para tratamento de carcinoma de células escamosas na região de cabeça e pescoço, e efeitos adversos associados ao seu uso. Material e método: Foi realizado um ensaio clínico, duplo cego, no período de 2012 a 2013, com pacientes atendidos em um Hospital de referência para tratamento oncológico. A amostra foi composta por 17 pacientes que não apresentavam os sinais e sintomas de candidíase oral, os quais foram divididos em dois grupos: experimental (n=11): composto por pacientes que utilizaram o gel de Punica granatum Linn. 6,25%, desde o inicio do tratamento antineoplásico e concluído uma semana após o término do esquema terapêutico; controle (n=6): por pacientes que utilizaram o gel de Miconazol 2%, seguindo as mesmas orientações do grupo anterior. Os dados foram tabulados e analisados por meio da estatística descritiva e usado os testes Qui-quadrado e Cálculo da Correção Continuada de Yates (p<0,05). Resultado: Não se observou a candidíase oral em 63,6% dos pacientes do grupo experimental, e em nenhum paciente do grupo controle. Conclusão: A maioria dos pacientes que fizeram uso do gel experimental não apresentaram os sinais clínicos da infecção fúngica, e não houve a associação de efeitos adversos.

Is pomegranate peels infusion effective for disinfection of toothbrushes? / A infusão de cascas de romã é efetiva na desinfecção de escovas dentais?

Introduction: Methods of decontamination or sanitization of toothbrushes have been questioned. Objective: This study assessed the effectiveness of pomegranate peels infusion as a disinfectant of toothbrushes against Streptococcus mutans. Material and method: A sample of 16 schoolchildren aged between 7 and 9 years performed brushing 5 days/week, with a careful brushing once a day. After each day of brushing, the toothbrushes were washed and sprayed with one disinfectant solution. This procedure was repeated for 4 weeks using one of the different solutions per week: distilled water (G1; negative control), pomegranate (Punica granatum Linn) peels infusion (G2), 1% sodium hypochlorite (G3) and 0.12% chlorhexidine digluconate (G4). After the fifth day, toothbrushes were collected for laboratory analysis. Toothbrushes heads were subjected to agitation in saline dilution of 10–1, 10–2,10–3, and 25 μL of each dilution were seeded in mitis salivarius agar culture medium for S. mutans colony-forming unit (CFU) counting. One calibrated examiner (Kappa = 0.91) performed the CFU (mL–1 × 104) counts. Kruskal-Wallis and Dunn Multiple Comparison tests were used at a significance level of 5%. Result: G1 presented the highest number of CFU (3.9 ± 8.4), followed by G2 (3.2 ± 4.0). No S. mutans growth was observed in G3 and G4. There was no statistically significant difference between G1 and G2 and between G3 and G4 (p>0.05). Conclusion: Pomegranate infusion was completely ineffective for the disinfection of toothbrushes against S. mutans when compared with 1% sodium hypochlorite and 0.12% chlorhexidine digluconate solutions.

Introdução: Os métodos de descontaminação ou desinfecção de escovas dentais têm sido questionados. Objetivo: Este estudo avaliou a eficácia da infusão de cascas de romã como um desinfetante de escovas dentais contra Streptococcus mutans. Material e método: Uma amostra de 16 escolares com idade entre 7 e 9 anos realizou escovação dentária cuidadosa, uma vez ao dia por 5 dias/semana durante 4 semanas. Após cada dia de escovação, as escovas foram lavadas e pulverizadas com uma solução desinfetante. Este procedimento foi repetido por 4 semanas utilizando uma das diferentes soluções por semana: água destilada (G1; grupo controle), infusão de casca de romã (Punica granatum Linn) (G2), hipoclorito de sódio a 1% (G3) e digluconato de clorexidina a 0,12% (G4). Após o quinto dia, as escovas foram coletadas para análise laboratorial. As cabeças das escovas foram agitadas em solução salina diluída em 10–1, 10–2,10–3, e 25μL de cada diluição foi semeada em meio de cultura agar mitis salivarius para contagem de unidade formadora de colônias (UFC) de S. mutans. Um examinador calibrado (Kappa = 0,91) realizou a contagem de UFC mL–1 × 104. Os testes de Kruskal-Wallis e de Comparações Múltiplas de Dunn foram usados em um nível de significância de 5%. Resultado: G1 apresentou o maior número de UFC (3,9 ± 8,4), seguido de G2 (3,2 ± 4,0). Não foi observado crescimento de S. mutans em G3 e G4. Não houve diferença estatisticamente significante entre G1 e G2 e entre G3 e G4 (p>0,05). Conclusão: A infusão de romã foi completamente ineficaz para a desinfecção de escovas dentais contra S. mutans quando comparada às soluções de hipoclorito de sódio a 1% e digluconato de clorexidina a 0,12%.

Punica granatum: quantificação de polifenóis de extratos e potencial antifúngico contra Candida albicans / Punica granatum: quantification of extract of polyphenols and potential antifungal against candida albicans

As propriedades antimicrobianas da romã são atribuídas aos compostos fenólicos, mais especificamente aos taninos hidrolisáveis (THs) galotaninos (ácido gálico) e elagitaninos (ácido elágico), substâncias naturais de defesa da planta. Os objetivos deste estudo foram avaliar os níveis de ácido elágico e fenóis totais, rendimento dos métodos de extração e o potencial inibitório sobre Candida albicans de extratos de partes da Punica granatum. Amostras em triplicata de cascas, sementes e folhas desidratadas, trituradas, pulverizadas, foram submetidas a dois métodos de extração: soxhlet tendo como solventes etanol e metanol e percolação tendo como solvente o etanol. Após a obtenção dos extratos, foram determinados os teores de ácido elágico por cromatografia liquida de alta eficiência e fenóis totais expressos em ácido gálico pelo método espectrofotométrico. A atividade antifúngica dos extratos foi avaliada pelo método de difusão em disco, seguindo-se as normas do National Committee for Clinical and Laboratory Standards (NCCLS document M2-A8, 2003a.). As maiores concentrações de fenóis totais e de ácido elágico foram encontradas nas folhas e na casca da romã. Verificou-se maior eficiência de rendimento por meio da percolação. Os resultados de difusão em disco revelaram maior sensibilidade da cepa de C. albicans aos extratos etanólicos da casca por ambos os métodos de extração. O método percolação alcoólica a 70% e 25ºC e a casca da romã apresentaram a maior eficiência de extração e de atividade anti-fúngica contra uma cepa clínica de C. albicans(AU)

The antimicrobial properties of pomegranate are attributed to the phenolic compounds, more specifically the hydrolyzable tannins (THs) galotaninos (gallic acid) and elagitaninos (ellagic acid), natural plant defense substances. The objectives of this study were to evaluate the levels of ellagic acid and total phenols, yield of the extraction methods and the inhibitory potential against Candida albicans of extracts from parts of Punica granatum. Samples of dried, peels, seeds and leaves were used in triplicates and the extracts were obtained by Soxhlet system and percolation using respectively ethanol, methanol and ethanol solvents. After obtaining the extracts, the ellagic acid contents were determined by high performance liquid chromatography (HPLC) and total phenols expressed in gallic acid by the spectrophotometric method. The antimicrobial activity was evaluated by the disc diffusion method, following the standards of the National Committee for Clinical and Laboratory Standards (NCCLS document M2-A8, 2003a.). The highest concentrations of THs were found in leaves and pomegranate peel. Greater yield efficiency was verified by percolation. The results of diffusion on disc revealed higher sensitivity of the C. albicans strain to the ethanolic extracts of peels by both methods of extraction, presenting inhibition halos of approximately 10 mm. The alcoholic percolation method at 70% and 25ºC and the pomegranate peel showed the highest extraction efficiency and antifungal activity against a clinical strain of C. albicans(AU)

Acción virucida directa sobre el virus influenza de un extracto de Punica granatum L (granada) / Direct virucidal action against influenza virus of an extract of Punica granatum L (granada)

INTRODUCCIÓN: la especie vegetal Punica granatum L. se conoce en Cuba como granada. A esta planta se le atribuye acción anticatarral en la medicina tradicional, entre otras propiedades. En estudios previos realizados al extracto hidroalcohólico liofilizado preparado con el fruto de esta planta, se informaron la presencia de numerosos componentes químicos, la mayoría flavonoides. Estos compuestos, unidos a la variedad de metabolitos secundarios detectados, le confieren a este liofilizado la posibilidad de poseer acción antiinfluenza, tal como ha sido demostrado en estudios previos del mismo. OBJETIVO: evaluar la acción virucida directa del extracto hidroalcohólico liofilizado de P. granatum frente a la cepa Influenza A/Mississippi/1/85 (H3N2), con diferentes variantes de tratamiento. MÉTODOS: las variantes de tratamiento directo se realizaron en 27 combinaciones de las variables; tiempo de contacto de: 60, 30 y 15 minutos; concentración del extracto de: 1000, 200 y 125 µg/mL y temperatura de incubación de la mezcla extracto-virus: 4, 25 y 37 0C. La presencia o no de la hemaglutinina del virus influenza en cada una de las muestras tratadas, se midió por la titulación de la Inhibición de la Hemaglutinación (IHA) y el título infectivo viral (DIE50). RESULTADOS: la concentración mínima efectiva para ejercer el extracto liofilizado, la acción virucida directa, in vitro, fue 125 µg/mL, a los 15 minutos. La acción virucida directa de éste extracto estuvo siempre presente en las diferentes temperaturas y tiempos de exposición ensayados. CONCLUSIONES: la variante de ensayo que utilizó 125 µg/mL, con independencia del tiempo y la temperatura de tratamiento, resultó suficiente efectiva para reducir la presencia de hemaglutinina del virus influenza.

INTRODUCTION: Punica granatum L. is known in Cuba as grenade. In traditional medicine, among other properties, antiflu action is attributed to this plant. In previous studies with the hydroalcoholic lyophilized extract, prepared with the fruit of this specie, several chemical compounds were reported, specially the presence of flavonoids. The variety of secondary metabolites detected for this lyophilized extract, added to a flavonoid fraction confers a high possibility of anti-influenza activity, as has been demonstrated in previous studies. OBJECTIVE: to evaluate the virucidal activity of the hydroalcoholic lyophilized extract of P. granatum against Influenza A/Mississippi/1/85 (H3N2), with different schemes of treatments. METHODS: the different schemes of treatments included 27 variants of the variables such as contact time of 60, 30 and 15 minutes; extract concentration of 1000, 200 and 125 µg/mL; an incubation temperature of the mix extract-virus of 4, 25 and 37 0C; and the corresponding replicas. The presence or not of hemaglutinin of influenza virus in each one of the treated samples, was measured by titration of Hemaglutination Inhibition (HAI) and the Embryo Infection Doses (EID50). RESULTS: the minimal effective concentration to show in the hydroalcoholic lyophilized extract the direct virucidal action in vitro was 125 µg/mL, in 15 minutes of contact. This virucidal action was always present in the different assessed temperature and time exposures. CONCLUSIONS: the treatment of 125 µg/mL, regardless of time and temperature of treatment, was effective enough to reduce the presence of hemaglutinin of the influenza virus.

Atividade antibacteriana do extrato bruto e fracionado de cascas dos frutos de Punica granatum Linn / Antibacterial activity of crude ethanolic and fractionated extracts of Punica granatum Linn. fruit peels

Currently it is clear the need to develop new antimicrobial seeking to solve problems such as antibiotic resistance, in this context medicinal plants has been using a prominent place, and knowledge of popular medicine shows itself to be a promising search tool. Peel of Punica granatum fruits are popularly used for the treatment of diarrhea, eye and upper airway inflammation, and in the external treatment of infectious sores. Thus, this study had the objective to evaluate the in vitro inhibitory effect of the crude ethanol extract of peels of P. granatum, three organic fractions and also fractions obtained by column chromatography, on reference microorganisms (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella typhimurium and Pseudomonas aeruginosa) by disk diffusion method. The obtained results evidenced that the ethyl acetate and aqueous fractions facing S. aureus and E. coli showed significant antimicrobial activity, close to the antimicrobial gentamicin and penicillin, respectively. In its turn the crude ethanolic extract of P. granatum and aqueous fraction showed inhibitory effect similar to the antimicrobial tetracycline facing P. aeruginosa. It was observed an increase in the inhibition of the microorganisms with increasing extract volume (from 10 to 30 ?L), being S. aureus and P. aeruginosa the most susceptible microorganisms. Differences in activity between the extracts and fractions can be partly explained by qualitative and quantitative variations in the secondary metabolites present in the extracts and fractions.(AU)

Atualmente está clara a necessidade do desenvolvimento de novos antimicrobianos buscando resolver problemas como a resistência a antibióticos, neste contexto, as plantas medicinais vem utilizando um lugar de destaque, e os conhecimentos da medicina popular mostram-se uma ferramenta de busca promissora. Cascas dos frutos de Punica granatum são utilizadas popularmente para o tratamento de diarreias, inflamações oculares e das vias aéreas superiores, e no tratamento externo de feridas infecciosas. Assim, este estudo teve o objetivo de avaliar o efeito inibitório in vitro do extrato bruto etanólico de cascas de P. granatum, três frações orgânicas e de frações obtidas por cromatografia em coluna, sobre microrganismos referência (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella typhimurium e Pseudomonas aeruginosa) pelo método de disco difusão. Os resultados obtidos evidenciaram que as frações acetato de etila e aquosa frente a S. aureus e E. coli demonstraram atividade significativa, próximo ao antimicrobiano gentamicina e penicilina, respectivamente. Já o extrato bruto etanólico de P. granatum e a fração aquosa apresentaram efeito inibitório semelhante ao antimicrobiano tetraciclina frente a P. aeruginosa. Observou-se um aumento na inibição dos microrganismos conforme o aumento do volume de extrato (de 10 para 30 ?L), sendo que S. aureus e P. aeruginosa foram os microrganismos mais suscetíveis. Diferenças na atividade entre os extratos e frações podem ser parcialmente explicadas por variações qualitativas e quantitativas de metabólitos secundários presentes no extrato e frações.(AU)

Extracción por ultrasonido de los polifenoles de la fruta del Punica granatum (Granada) / Ultrasound assisted extraction of polyphenols from Punica granatum (Grenada) fruit

INTRODUCTION: extraction of bioactive compounds from vegetable materials is a classical operation applied in many industrial processes. Few studies have made reference to processes to obtain extracts from Punica granatum. This fruit is generally consumed as such or as fermented juices. In Cuba, it is known as grenade and numerous studies have shown antiviral, antioxidant and antimicrobial properties. Maceration process is the main used technology in the preparation of extracts from Punica granatum fruit, being this a long and expensive process. Ultrasound-assisted extractions have been proven to significantly decreased extraction time and increased extraction yields in many vegetable materials. However, few papers report the use of this methodology in the extraction processes of Punica granatum. OBJECTIVE: to evaluate an ultrasound-assisted extraction process to extract polyphenols from Punica granatum fruit. METHODS: an experimental surface, response 32, randomized and replicate design was made to identify the effect of the extraction time and the alcoholic concentration of the menstruum as well as an extraction study in the course of time, keeping the best extraction conditions set in the design. RESULTS: the studied parameters did not show significant influence over the process (p= 0.0981 and p= 0.8504 for time of extraction and alcoholic content, respectively). The behaviour curve of the polyphenol extraction in time showed that top concentration values were reached at 60 minutes. CONCLUSIONS: according to results, the optimal conditions of polyphenol extraction were as follows: extraction time of 60 min, and 50 percent alcoholic concentration (v/v) as menstruum(AU)

INTRODUCCIÓN: la extracción de compuestos bioactivos a partir de material vegetal es una operación clásica aplicada en muchos procesos industriales. Pocos estudios han hecho referencia a la obtención de extractos a partir de la fruta del Punicam granatum. Esta fruta es generalmente consumida en forma natural o en jugos fermentados. En Cuba es conocida como granada y numerosos estudios han demostrado sus propiedades antivirales, antioxidantes y antimicrobianas. La maceración es el principal proceso empleado en la elaboración de extractos a partir de esta fruta, siendo un proceso largo y costoso. La extracción asistida por ultrasonido es una metodología que garantiza una disminución del tiempo de extracción e incrementa los rendimientos extractivos en muchos materiales. Sin embargo, pocos trabajos informan el empleo de esta metodología en procesos extractivos a partir de P. granatum. OBJETIVO: evaluar un proceso de extracción asistida por ultrasonido para extraer los polifenoles de la fruta P. granatum. MÉTODOS: se realizó un diseño experimental de superficie respuesta 32 aleatorizado replicado en el punto central, para estudiar la influencia del tiempo de extracción y la concentración alcohólica del menstruo. Así como un estudio de extracción en el tiempo manteniendo las mejores condiciones establecidas en el diseño. RESULTADOS: los parámetros estudiados no presentaron una influencia significativa para el proceso (p= 0,0981 y p= 0,8504 para el tiempo de extracción y la concentración alcohólica del menstruo, respectivamente). La curva del comportamiento de la extracción de polifenoles en el tiempo demostró que a los 60 min se alcanzaban valores máximos de concentración. CONCLUSIONES: de acuerdo con los resultados, las condiciones óptimas de extracción fueron: tiempo de extracción 60 min y solución hidroalcohólica al 50 por ciento (v/v) como menstruo(AU)

Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Punica granatum Linn. sobre Staphylococcus spp. isolados de leite bovino / Antibacterial activity of the hydroalcoholic extract of Punica granatum Linn. on Staphylococcus spp. isolated from bovine milk

Mastite bovina é caraterizada por inflamação da glândula mamária, geralmente em resposta à infecção bacteriana, compromete quali-quantitativamente a produção leiteira. Este estudo objetivou verificar a atividade antibacteriana in vitro do extrato hidroalcoólico da casca da romã sobre bactérias isoladas de leite bovino. As colônias de Staphylococcus spp. foram ressuspendidas a escala 6 de MacFarland e ajustada a sua concentração por espectrofotometria UV visível na concentração de 10 mL-1. Os extratos foram avaliados em quintuplicata, em sete concentrações: de 4mg mL-1 até 0,0625 mg.mL-1. A sensibilidade dos isolados microbianos foi determinada utilizando o teste de difusão em disco e os resultados que apresentaram zonas de inibição correspondentes a valores a partir de 15 mm, foram considerados sensíveis. Os resultados foram avaliados pelo método ANOVA, teste de Tukey 5 por cento, utilizando o SISVAR 5.3 -DEX/UFLA. Adicionalmente o extrato foi avaliado quanto à atividade antioxidante, teores de fenóis e flavonoides totais. Para tanto o extrato foi diluído em sete concentrações: de 25 a 1000µg.mL-1, e avaliado em triplicata. O crescimento bacteriano foi inibido a partir da concentração de 4mg.mL-1 e a ação antioxidante foi verificada a partir de 50µg.mL-1, com valores correspondentes a 4.62 por cento, atingindo platô de 64,90 por cento na concentração de 500µg.mL-1. Na avaliação da atividade captadora de radicais, empregando o radical livre DPPH, o extrato demonstrou atividade antioxidante (IC50 por cento= 378,80µg/mL). Porém, não foi possível correlacionar a atividade antioxidante aos teores de fenóis e flavonoides. Talvez a presença de outras substâncias alcaloides e taninos presentes no extrato, possam ter sido as responsáveis pela atividade antioxidante encontrada. Conclui-se que o extrato hidroalcoólico de Punica granatum Linn. apresenta atividade antimicrobiana contra Staphylococcus spp., demonstrando potencial benefício para o controle da mastite bovina.

Bovine mastitis is characterized by inflammation of the mammary gland, usually in response to bacterial infection, affecting qualitatively and quantitatively milk production. This study aimed to determine the antibacterial activity in vitro of the hydroalcoholic extract of the bark of the pomegranate on bacteria isolated from bovine milk. The colonies of Staphylococcus spp. were resuspended in 6 MacFarland scale and adjusted its concentration by UV visible spectrophotometry at a concentration of 10(6)ml-1. The extracts were evaluated in quintuplicate in seven concentrations: from 4 up to 0.0625mg.mL-1. The sensitivity of microbial isolates was determined using the disk diffusion and the results that showed inhibition halos corresponding to values from 15mm were considered susceptible. The results were evaluated by ANOVA, Tukey test 5 percent using the SISVAR 5.3-DEX/UFLA. Additionally the extract was assessed as for the antioxidant activity, content of phenols and total flavonoids. The extract was diluted into seven concentrations: 25-1.000µg.mL-1, and evaluated in triplicate. The bacterial growth was inhibited starting from the concentration of 4 mg.mL-1 and antioxidant activity was observed from 50µg.mL-1, with values corresponding to 4.62 percent reaching the plateau of 64.90 percent at a concentration of 500µg.mL-1. In evaluating the radical scavenging activity, using the free radical DPPH, the extract demonstrated antioxidant activity (IC50 percent= 378.80µg/mL). However it has not been possible to correlate the antioxidant activity with the levels of phenols and flavonoids. Perhaps the presence of other substances alkaloids and tannins present in the extracts may have been responsible for the antioxidant activity found. It was concluded that the hydroalcoholic extract of Punica granatum Linn. has antimicrobial activity against Staphylococcus spp., demonstrating potential benefit for the control of bovine mastitis.

Desarrollo de un proceso tecnológico a escala de laboratorio para la extracción de polifenoles totales del fruto de la Punica granatum L / Development of a lab-scale technological process for total polyphenol extraction from Punica granatum L. fruit

Introducción: Punica granatum L., (Punicaceae) es una especie conocida en Cuba como granada. Algunos fitocomponentes presentes en la fruta muestran una fuerte actividad antioxidante. En la medicina tradicional esta planta es empleada en el tratamiento de infecciones parasitarias, diarreas y disentería, así como en el tratamiento de asma, catarro, fiebre, inflamaciones y otras. En años recientes, la actividad biológica de los polifenoles presentes en la fruta de esta especie, ha despertado el interés de los investigadores y la industria farmacéutica.Objetivo: establecer un proceso a escala de laboratorio que permita extraer los polifenoles totales de la fruta.Métodos: se aplicó un proceso de maceración para la extracción de los polifenoles de la fruta y se realizó la optimización de los parámetros mediante diseños experimentales. Se evaluaron las variables independientes: tiempo de extracción, relación droga-menstruo y concentración alcohólica.Resultados: las tres variables presentaron una influencia significativa sobre el proceso de extracción de polifenoles.Conclusiones: en las condiciones de trabajo establecidas, la extracción óptima es la siguiente: tiempo de extracción de 72 h, relación droga-menstruo de 1:20 y concentración alcohólica del 50 por ciento (v/v)

Introduction: Punica granatum L., (Punicaceae) is one species known in Cuba as granate. Some phytocomponents of the fruit show strong antioxidant activity. This plant is used in the traditional herb medicine to treat parasitic infections, diarrheas and dysentery, asthma, flu, fever, inflammation and other illnesses. In recent years, the biological activity of phenols present in the fruit has aroused the interest of both researchers and the drug industry. Objective: to set a lab-scale process that makes it possible to extract total phenols from the fruit. Methods: a maceration process was used to extract phenols from the fruit and the parameters were optimized through experimental designs. The independent variables were time of extraction, drug/menstruum ratio and alcohol concentration. Results: the three variables had significant influences over the process of extraction of polyphenols. Conclusions: under the set working conditions, the optimal extraction is as follows: time of extraction of 72 hours, drug/menstruum ratio of 1:20 and alcohol concentration of 50 percent(v/v)